气相色谱法测定法莫替丁中有机溶剂残留量
摘要:目的：建立法莫替丁中甲醇、丙酮和乙醇残留量的测定方法。方法采用毛细管气相色谱法,色谱柱为HP-Wax;柱温: 50℃保持3min,以20℃/min升温至120℃保持4min;载气为氮气;检测器为FID;外标法计算含量。结果：在该色谱条件下,测得各溶剂线性均良好( r =0.9996～0.9997) ;平均回收率分别为97.86% , 98.16%和98.04% , RSD 分别为1.34% , 1.21%和0.94%;甲醇、丙酮和乙醇的最低检测限分别为0.004%、0.002%和0.004%;3批样品中上述有机溶剂残留量均符合要求。结论：该毛细管气相色谱法灵敏、准确、可靠,适用于本品中有机溶剂残留量测定。
关键词:法莫替丁;毛细管气相色谱法;有机溶剂残留量
药物中的残留溶剂是指在原料药或赋型剂的生产中,以及在制剂制备过程中产生或使用的有机挥发性化合物。由于残留溶剂不仅没有疗效,还可能增加药物的毒副作用,而且影响药物的稳定性,故所有的有机溶剂应尽可能除去。为了保护患者免受药物中残留有机溶剂的伤害,需对药品在生产过程中引入的有机溶剂残留量进行测定。法莫替丁为组胺H2受体阻滞药,对胃酸分泌具有明显的抑制作用,适用于消化性溃疡(胃、十二指肠溃疡) 、急性胃黏膜病变、反流性食管炎以及胃泌素瘤。由于合成本品过程中使用甲醇等有机溶剂,故有可能会残留在产品中,本文参考中国药典2000年版二部法莫替丁项下方法,建立了气相色谱法,以毛细管柱代替填充柱,同时测定法莫替丁中甲醇、丙酮和乙醇残留量,结果表明本法分离度高、灵敏、准确且简便。
1 实验部分
1. 1 仪器与试药
气相色谱仪,甲醇、丙酮、乙醇及二甲基甲酰胺(DMF)均为分析纯试剂。法莫替丁自制样品(批号200302001、200302002、200302003), 法莫替丁市售品(郑州瑞泰制药有限公司, 批号20030203) 。
1. 2 色谱条件
色谱柱: (键合聚乙二醇, 30m×0.32mm ×0.50μm) ;柱温:50℃保持3min,以20 ℃/min升温至120 ℃保持4min;检测室温度: 200℃;进样温度: 200℃; 载气: 氮气; 柱头压: 68.95kPa; FDI检测器;顶空进样0.5 mL 。
1. 3 溶液配制
对照溶液: 称取299.8mg甲醇、500.2mg丙酮、499.6mg乙醇于100mL 容量瓶中,加DMF稀释至刻度,为对照贮备溶液,每1mL含2.998 mg甲醇、5.002mg丙酮、4.996mg乙醇。依次取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL 对照贮备溶液
分别至10 mL容量瓶中,加DMF稀释至刻度,制得系列浓度的对照溶液, 每1mL含甲醇60. 0、120、180、240、300μg;丙酮100、200、300、400、500 μg;乙醇100、200、300、400、500μg。
供试品溶液:称取2g供试品于20mL 容量瓶中,加DMF溶解并稀释至刻度。测定:精密量取对照溶液和供试品溶液各10mL,分别置于25mL顶空瓶中,在80℃的恒温箱中加热30min,取顶空气0.5mL进样。
2 结果与讨论
2. 1 专属性试验
取甲醇、丙酮和乙醇依次进样,记录保留时间作为定性指标。色谱图中各成分峰的保留时间分别为2.577min、1. 913mim和3.048min,各成分峰之间峰分离度良好。
2. 2 线性范围
取系列浓度的对照溶液(每1mL含甲醇60.0、120、180、240、300μg;丙酮100、200、300、400、500μg ;乙醇100、200、300、400、500 μg)依次进样,记录峰面积。将峰面积对浓度进行回归,得回归方程。
2. 3 回收率试验
精密称定法莫替丁样品(批号200302001)约0.5g,精密加入中浓度对照品溶液10mL,混匀,进样0.5mL,计算甲醇、丙酮和乙醇的平均回收率(n=3)分别为97.86% , 98.16%和98.04% ,RSD分别为1.34% ,1.21%和0.94% ,表明方法准确可靠。
2. 4 精密度试验
取中浓度的对照溶液(每1mL含甲醇180μg、丙酮300μg和乙醇300μg)连续进样6次,记录色谱图,甲醇、丙酮和乙醇峰面积的RSD 分别为1. 91%、1.34%和0.93% ( n=6) ,表明精密度良好。
2. 5 最低检测限
以信噪比3∶1( S/N=3)计算,甲醇、丙酮和乙醇的最低检测限分别为0.004%、0.002%和0.004% ,根据人用药品注册技术要求协调会(简称ICH)对药品中限制使用溶剂残留限量规定为甲醇≤0.3% ,丙酮和乙醇≤0.5%,表明本方法的检测灵敏度符合要求。
2. 6 样品测定结果
取自制样品3 批(批号200302001、200302002、200302003)及上市品1批,依法测定,用标准曲线回归方程计算甲醇、丙酮和乙醇的残留量,结果表明, 3批自制样品及1批上市品中甲醇、丙酮和乙醇3种有机溶剂的残留量均符合ICH规定;自制样品所采用的合成工艺和技术路线与上市品有所不同,因此3种有机溶剂的残留量也不同,自制样品采用乙醇作为精制溶剂,故只检出乙醇;上市品则未检出乙醇,而甲醇和丙酮有一定的残留。
3 讨论与小结
在中国药典2000年版二部,法莫替丁中甲醇的GC检查方法采用填充柱,本法采用毛细管柱法,由于毛细管柱法的分离度好,且顶空进样与溶液法直接进样相比具有灵敏度高、干扰小的优点,因此用于同时测定药物中的甲醇、丙酮、乙醇残留量,效果令人满意。DMF由于溶解性好,对药物和甲醇、丙酮、乙醇均有较好的溶解能力,因此,本法选用DMF作溶剂。所建立的甲醇、丙酮和乙醇残留量的GC检查方法,经方法学检验是准确可靠的,可用于法莫替丁中甲醇、丙酮和乙醇残留量的检查。
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